POVZETEK IN RAZLAGA TESTA
Malarija je hemolitična vročinska bolezen, ki jo prenašajo komarji in okuži več kot 200 milijonov ljudi in ubije več kot 1 milijon ljudi na leto.Povzročajo jo štiri vrste plazmodijev: P. falciparum, P. vivax, P. ovale in P. malariae.Vsi ti plazmodiji okužijo in uničijo človeške eritrocite, povzročijo mrzlico, vročino, anemijo in splenomegalijo.P. falciparum povzroča hujše bolezni kot druge vrste plazmodijev in predstavlja večino smrti zaradi malarije.P. falciparum in P. vivax sta najpogostejša patogena, vendar obstajajo precejšnje geografske razlike v porazdelitvi vrst.
Tradicionalno se malarija diagnosticira s prikazom mikroorganizmov na debelih brisih periferne krvi, obarvanih z Giemso, različne vrste plazmodija pa se razlikujejo po njihovem videzu v okuženih eritrocitih1.Tehnika je sposobna natančne in zanesljive diagnoze, vendar le, če jo izvajajo usposobljeni mikroskopisti z uporabo definiranih protokolov2, kar predstavlja velike ovire za oddaljene in revne predele sveta.
Hitri test za malarijo Pf / Pan Antigen je razvit za reševanje teh ovir.Test uporablja par monoklonskih in poliklonskih protiteles proti specifičnemu proteinu P. falciparum, Histidine Repeat Protein II (pHRP-II) in par monoklonskih protiteles proti plazmodijevi laktat dehidrogenazi (pLDH), proteinu, ki ga proizvajajo štiri vrste plazmodija, kar omogoča hkratno odkrivanje in razlikovanje okužbe s P. falciparum in/ali katero koli drugo. trije plazmodiji.Izvaja ga lahko neusposobljeno ali minimalno usposobljeno osebje, brez laboratorijske opreme.
NAČELO
Komplet za hitri test Pf/Pan Malaria Rapid Test je kromatografski imunološki test z bočnim tokom.Komponente testnega lističa so sestavljene iz: 1) konjugirane blazinice v bordo barvi, ki vsebuje mišje protitelo proti pHRP-II, konjugirano s koloidnim zlatom (konjugati pHRP II-zlato) in mišje protitelo proti pLDH, konjugirano s koloidnim zlatom (konjugati pLDH-zlato),
2) trak z nitrocelulozno membrano, ki vsebuje dva testna trakova (pasova Pan in Pv) in kontrolni pas (pas C).Pas Pan je predhodno prevlečen z monoklonskim protitelesom proti pLDH, s katerim je mogoče zaznati okužbo s katero koli od štirih vrst plazmodijev, pas Pf je predhodno prevlečen s poliklonskimi protitelesi proti pHRP-II za odkrivanje okužbe s Pf, pas C pa je prevlečen s kozjim protimišjim IgG.
Med preskusom se ustrezen volumen vzorca krvi odmeri v vdolbino za vzorec (S) testne kasete, v vdolbino pufra (B) pa se doda lizni pufer.Pufer vsebuje detergent, ki lizira rdeče krvne celice in sprosti različne antigene plazmodija, ki migrirajo s kapilarnim delovanjem po traku v kaseti.pHRP-II, če je prisoten v vzorcu, se bo vezal na konjugate pHRP II-zlato.Imunokompleks se nato ujame na membrano s predhodno obloženimi protitelesi proti pHRPII in tvori bordo obarvan pas Pf, kar kaže na Pf pozitiven rezultat testa.pLDH, če je prisoten v vzorcu, se bo vezal na zlate konjugate pLDH.Imunokompleks se nato ujame na membrano s predhodno obloženim protitelesom proti pLDH in tvori bordo obarvan pas Pan, kar kaže na pozitiven rezultat testa plazmodija.V odsotnosti pasu Pan se lahko priporoči pozitiven rezultat testa za katerega koli od ostalih treh plazmodijev.
Odsotnost testnih pasov (Pan in Pf) kaže na negativen rezultat.Test vsebuje notranjo kontrolo (trak C), ki mora pokazati bordo obarvan pas imunokompleksa kozjega protimišjega IgG / mišjega IgG (pHRP-II in pLDH-zlati konjugati), ne glede na razvoj barve na katerem koli od testnih trakov.V nasprotnem primeru je rezultat testa neveljaven in je treba vzorec ponovno testirati z drugo napravo.
