POVZETEK IN RAZLAGA TESTA
Malarija je hemolitična vročinska bolezen, ki jo prenašajo komarji in okuži več kot 200 milijonov ljudi in ubije več kot 1 milijon ljudi na leto.Povzročajo jo štiri vrste plazmodijev: P. falciparum, P. vivax, P. ovale in P. malariae.Vsi ti plazmodiji okužijo in uničijo človeške eritrocite, povzročijo mrzlico, vročino, anemijo in splenomegalijo.P. falciparum povzroča hujše bolezni kot druge vrste plazmodijev in predstavlja večino smrti zaradi malarije.P. falciparum in P. vivax sta najpogostejša patogena, vendar obstajajo precejšnje geografske razlike v porazdelitvi vrst.
Tradicionalno se malarija diagnosticira s prikazom mikroorganizmov na debelih brisih periferne krvi, obarvanih z Giemso, različne vrste plazmodija pa se razlikujejo po njihovem videzu v okuženih eritrocitih.Tehnika je sposobna natančne in zanesljive diagnoze, vendar le, če jo izvajajo usposobljeni mikroskopisti z uporabo definiranih protokolov, kar predstavlja velike ovire za oddaljene in revne predele sveta.
Hitri test za malarijo Pf/Pv Ag je razvit za reševanje teh ovir.Uporablja protitelesa, specifična za P. falciparum s histidinom bogatim proteinom-II (pHRP-II) in za P. vivax laktat dehidrogenazo (Pv-LDH) za istočasno odkrivanje in razlikovanje okužbe s P. falciparum in P. vivax.Test lahko izvaja neusposobljeno ali minimalno usposobljeno osebje, brez laboratorijske opreme
NAČELO
Hitri test za malarijo Pf/Pv Ag je kromatografski imunski test z bočnim tokom.Komponente testnega traku so sestavljene iz: 1) bordo obarvane konjugirane blazinice, ki vsebuje mišje protitelo proti Pv-LDH, konjugirano s koloidnim zlatom (konjugati Pv-LDH-zlato) in mišje protitelo proti pHRP-II, konjugirano s koloidnim zlatom (konjugati pHRP-II-zlato), 2) trak z nitrocelulozno membrano, ki vsebuje dva testna trakova (pasova Pv in Pf) in kontrolni pas ( pas C).Pas Pv je predhodno prevlečen z drugim mišjim specifičnim protitelesom proti Pv-LDH za odkrivanje okužbe s Pv, pas Pf je predhodno prevlečen s poliklonskimi protitelesi proti pHRP-II za odkrivanje okužbe s Pf, pas C pa je prevlečen s kozjim protimišjim IgG.
Med preskusom se ustrezen volumen vzorca krvi odmeri v vdolbino za vzorec (S) testne kasete, v vdolbino pufra (B) pa se doda lizni pufer.Pufer vsebuje detergent, ki lizira rdeče krvne celice in sprosti različne antigene, ki migrirajo s kapilarnim delovanjem po traku v kaseti.Če je Pv-LDH prisoten v vzorcu, se bo vezal na konjugate Pv-LDH-zlato.Imunokompleks se nato ujame na membrano s predhodno obloženim protitelesom proti Pv-LDH in tvori bordo obarvan pas Pv, kar kaže na pozitiven rezultat testa Pv.Druga možnost je, da se pHRP-II, če je prisoten v vzorcu, veže na konjugate pHRP-II-zlato.Imunokompleks se nato ujame na membrano s predhodno obloženimi protitelesi anti-pHRP-II, ki tvorijo bordo obarvan pas Pf, kar kaže na Pf pozitiven rezultat testa.Odsotnost testnih trakov kaže na negativen rezultat.Test vsebuje notranjo kontrolo (trak C), ki mora pokazati bordo obarvan trak imunokompleksa kozjega protimišjega IgG / mišjega IgG (anti-Pv-LDH in anti-pHRPII)-zlatih konjugatov ne glede na razvoj barve na katerem koli testnem traku.V nasprotnem primeru je rezultat testa neveljaven in je treba vzorec ponovno testirati z drugo napravo.
